Действия проходят и затрагивают все части игры. Добавлены новые персонажи, которые не особо влияют на сюжет, но так же являются её частью. Флориэнна Мичела Де Наполи - Неополетанская девушка-ассассин, дворянского происхождения, которая так же, как и её давний друг Эцио Аудиторе, начинает восстание Рима и готовит нападение на Чезаре Борджиа. Флориэнна - обладательница древнего артефакта, который можно сравнить с Яблоком Эдема по его силе. Семья Мичела Де Наполи встала во главе провинции Ареццо,